噴霧干燥機一個地高辛配基
標記 !!光敏生物素（"#$%$&’$%’(）是一種光敏化合物，通過一個連接臂，一端連接生物素，另一端連接化學性質活潑的光敏基團。在強可見光下，光敏基團與核苷酸特定部位共價結合，合成光敏生物素標記探針。 !!（三）地高辛標記物 !!地高辛（)’*$+’*,(’(，-’*）是類固醇半抗原化合物，通過一個 ..個碳原子的交聯臂與尿嘧啶核苷酸的嘧啶環上的第 /位碳相連，形成地高辛標記的尿嘧啶核苷酸。地高辛標記的效率高，一般每 01 20/個核苷酸（(%）中就帶噴霧干燥機一個地高辛配基，雜交后又有靈敏的免疫酶學檢測系統，靈敏度高，有取代生物素標記探針的趨勢。 !!（四）分子信標 !!分子信標（3$4,56478 &,75$(）是根據核酸堿基配對原則和熒光共振能量轉移現象設計的。分子信標長約 0/ (%，空間結構呈莖環形，其中環序列是和靶核酸互補的探針，莖長 / 29 (%，由與靶序列無關的互補序列構成，莖的一端連上一個熒光分子，另一端連上一個淬滅分子（ :6,(5#,8）。當無靶序列時，分子信標呈莖環結構，熒光分子和淬滅分子非常接近，熒光分子發出的熒光被淬滅分子吸收并以熱的形式散發，檢測不到熒光信號。當有靶序列存在時，分子信標的環序列和靶序列特異的結合，形成的雙鏈比莖環結構更穩定，熒光分子和淬滅分子分開，熒光分子發出的熒光不被淬滅分子吸收，則可檢測到熒光。二、分子雜交的方法 !!分子雜交分為固相雜交、液相雜交和固相液相雜交。
固相液相雜交是把欲檢測的核酸樣本或探針先結合到固相載體上，再與液體中的探針或核酸樣品進行雜交反應，漂洗去除未反應的探針或核酸樣品，經檢測雜交信號，判斷雜交結果。 !!（一）斑點雜交 !!斑點雜交（)$% &4$% #;&8’)’<7%’$(）是將>?或 ->?變性后直接點樣在硝酸纖維素膜上，探針放在雜交液內進行雜交。方法簡便、快速、靈敏，用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?點陣（->? 7887;）是將相關的探針按順序點在硝酸纖維素膜上，待檢樣品放在雜交液內，檢查樣品中的核酸能和哪一個探針雜交。 !!基因芯片（*,(, 5#’"@）是將探針點在硅片上，待測樣品放在雜交液內進行雜交，借助計算機判斷樣品中的核酸能和哪一個探針雜交。 ->?點陣和基因芯片點在固相上的是探針的序列，沒有進行標記。待測核酸樣品在雜交前進行標記。 !!斑點雜交、 ->?點陣、基因芯片主要是確定待檢樣品中有沒有所要的核酸。 !!（二）原位雜交 !!原位雜交
（’( @’%6 #;&8’)’<7%’$(）是用核酸探針與細胞和組織切片中的核酸進行雜交并對其進行檢測>?分子經限制酶切，在瓊脂糖凝膠上電泳使 ->?片段依據相對分子質量大小分開，再將電泳結果從凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上，經固定和變性后，在膜上與探針進行雜交，確定電泳條帶中哪一條是所要的 ->?。開始將瓊脂糖上的 ->?條帶轉移到硝酸纖維素膜上，采用的是用吸墨汁紙吸水（&4$%%’(*）的方法（見圖 .9 9?）。英國愛丁堡大學的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技術!"!建立了此方法， !"#$%&’(印跡雜交由此得名。現在將 )*+轉移到硝酸纖維素膜上多采用轉移電泳的方法（見圖 ,--.）。圖 ,--/ !"#$%&’(印跡雜交 //（0）*"’$%&’(印跡雜交（ ("’$%&’( 12"$$3(4）/ *"’$%&’(印跡雜交是經典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印跡雜交方法基本相似，是將 5*+經電泳分開后轉移到硝酸纖維素膜上進行雜交。 //（6）7&8$&’(印跡雜交（9&8$&’( 12"$$3(4）/ 7&8$&’(印跡雜交是將蛋白質經聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后轉移到硝酸纖維素膜上，檢測哪一種蛋白質能和抗體反應，也叫免疫印跡技術。第三節 /聚合酶鏈反應
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